單抗基因釣取及測(cè)序分析服務(wù)
雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)是單抗制備的重要途徑，傳統(tǒng)培養(yǎng)基需要加入血清，易造成批次間差異和培養(yǎng)體系的不穩(wěn)定，且存在一定的污染風(fēng)險(xiǎn)。無血清培養(yǎng)馴化去除培養(yǎng)基中血清成分對(duì)后續(xù)抗體質(zhì)量有利。細(xì)胞馴化即是通過生產(chǎn)或檢測(cè)用細(xì)胞的培養(yǎng)條件或培養(yǎng)環(huán)境經(jīng)過一定適應(yīng)性改變，馴化為滿足生產(chǎn)或檢測(cè)需求的培養(yǎng)條件。馴化成功的雜交瘤細(xì)胞通過轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)大規(guī)模制備不含有小鼠的各種雜蛋白(包括Ig)和動(dòng)物病毒的單克隆抗體。
雜交瘤測(cè)序技術(shù)即為雜交瘤細(xì)胞抗體基因提取，是通過提取雜交瘤細(xì)胞株中的總mRNA，并反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA，利用RACE或者物種亞型特異性簡并引物擴(kuò)增獲取可變區(qū)序列，從而獲得雜交瘤單克隆細(xì)胞株的抗體基因信息，該技術(shù)是建立抗體的指紋密碼、知識(shí)產(chǎn)權(quán)保護(hù)或者基因工程抗體表達(dá)的前提。其應(yīng)用價(jià)值在于：①為申請(qǐng)保護(hù)性專利提供有權(quán)單抗序列信息；②保留單克隆抗體序列信息，防止雜交瘤細(xì)胞丟失單抗信息；③幫助目標(biāo)細(xì)胞株的選擇，表達(dá)純度更高的重組單克隆抗體；④縮短雜交瘤細(xì)胞克隆化耗時(shí)過程，加速單克隆抗體產(chǎn)生速度；⑤構(gòu)建嵌合抗體或人源化抗體。
服務(wù)優(yōu)勢(shì)
1）擁有成熟的細(xì)胞馴化工藝平臺(tái)，已經(jīng)成功馴化過多個(gè)雜交瘤細(xì)胞單克隆抗體株；
2）擁有成熟的無血清細(xì)胞上清生產(chǎn)線，可以制備從毫克到克級(jí)的單克隆抗體；
3）抗體生產(chǎn)程序嚴(yán)格按照GMP標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行；
4）嚴(yán)格保密客戶的細(xì)胞系、抗體等項(xiàng)目信息；
5）經(jīng)過多次驗(yàn)證的雜交瘤測(cè)序引物，每一步驟嚴(yán)格采用高保真酶進(jìn)行擴(kuò)增，保證序列與天然抗體一致性，具有極高的成功率與快速交付速度；
6）完備的生物信息學(xué)分析，去除冗余序列信息，追蹤確保研發(fā)和生產(chǎn)計(jì)劃中的批次一致性；
7）多輪亞克隆細(xì)胞后，鑒定細(xì)胞單抗亞型，從中挑取3-5株，提取雜交瘤細(xì)胞抗體基因；
8）可提供從雜交瘤亞克隆、雜交瘤測(cè)序到抗體表達(dá)及驗(yàn)證一站式服務(wù)，可根據(jù)您的需求進(jìn)行選擇。
服務(wù)流程
服務(wù)周期
| 服務(wù)流程 | 周期 | 交付內(nèi)容 |
| 細(xì)胞馴化 | 2~3周 |
1.無血清雜交瘤細(xì)胞株 2.無血清細(xì)胞上清 3.純化抗體 4.抗體QC驗(yàn)證報(bào)告 |
| 無血清上清抗體生產(chǎn) | 3~4周 | |
| 抗體純化及驗(yàn)證 | 3~4周 | |
| 雜交瘤亞克隆（可選） | 3-6周 | |
| RNA提取 |
1.抗體重鏈及輕鏈序列 2.分別含有抗體重鏈、輕鏈的商業(yè)表達(dá)載體 3.詳實(shí)的實(shí)驗(yàn)報(bào)告和鑒定/驗(yàn)證報(bào)告 4. 完全的知識(shí)產(chǎn)權(quán) 5. 實(shí)驗(yàn)報(bào)告 |
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| 反轉(zhuǎn)錄 | ||
| PCR 擴(kuò)增重鏈及輕鏈序列 | ||
| 測(cè)序驗(yàn)證 | ||
| 載體構(gòu)建 | ||
| 小試表達(dá)分析及ELISA驗(yàn)證（可選） | 2周 |
注：①客戶需提供數(shù)量>1×107的雜交瘤細(xì)胞；如需小試表達(dá)，需提供靶標(biāo)抗原
應(yīng)用案例
Fig 1. 雜交瘤細(xì)胞總RNA(A) 和抗體可變區(qū)基因擴(kuò)增(B)
Fig 2. 重鏈可變區(qū)基因測(cè)序部分結(jié)果
Fig 3. 輕鏈可變區(qū)基因部分測(cè)序結(jié)果
Fig 4. 不同序列重鏈輕鏈配對(duì)表達(dá)結(jié)果