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產(chǎn)品名稱：游離脂肪酸（FFA）含量檢測試劑盒
產(chǎn)品編號：BLGE297
產(chǎn)品規(guī)格：
| 產(chǎn)品組成 | 組分名稱 | BLGE297-100T |
| 自備溶液 | FFA試劑一 | 50 mL×1 瓶 |
| BLGE297-1 | FFA提取液 | 100 mL×1 瓶 |
| BLGE297-2 | FFA試劑二 | 20 mL×1 瓶 |
| BLGE297-3 | FFA試劑三 | 粉劑×2 瓶 |
| BLGE297-4 | FFA標(biāo)準(zhǔn)品 | 粉劑×1 支 |
| 說明書 | 1份 | |
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說明書 |
產(chǎn)品情況：游離脂肪酸，也稱為非酯化脂肪酸，在與白蛋白結(jié)合的血漿中循環(huán)。血清中游離脂肪酸的濃度與脂類代謝、糖代謝、內(nèi)分泌功能有關(guān)，游離脂肪酸的濃度會因為糖尿病、重癥肝障礙、甲狀腺功能亢進(jìn)等疾病而上升。
用有機溶劑萃取 FFA，含有 FFA 的有機液與三乙醇胺銅反應(yīng)，在有機相中形成脂肪酸銅 (銅皂) FFA - Cu，Cu 離子與顯色液反應(yīng)形成紫紅色絡(luò)合物，反應(yīng)形成的顏色深淺與 Cu 離子濃度的關(guān)系符合朗伯一比爾定律，因此可利用此反應(yīng)進(jìn)行比色。
檢出限：0.0390 μmol/mL
線性范圍：0.05 - 2 μmol/mL
儲存運輸：試劑盒在2 - 8 ℃干燥室溫條件下，可保存6個月；冰袋運輸。
注意事項：
（一）使用前請核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系技術(shù)支持；
（二）實驗前建議選擇 2 - 3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測；
（三）試劑三應(yīng)盡量晚配，可在操作到加入試劑二時，再配制試劑三；
（四）必須保證每管的震蕩頻率及時間一致；
（五）盡量在 30 min 內(nèi)完成測量；
（六）上層溶液不可直接加入到 96 孔板內(nèi)，需與試劑三混勻，并且測完后要密封好再丟棄；
（七）檢測試劑多數(shù)為有機溶劑，因此同一吸頭多次吸取會造成體積不準(zhǔn)，建議及時更換吸頭。
實驗流程：
（一）自備儀器和用品
50 mL玻璃瓶1個、10 mL 玻璃瓶1個、正庚烷、無水甲醇、氯仿、無水乙醇、蒸餾水、研缽/勻漿器、冰盒、臺式離心機、可調(diào)式移液槍、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96 孔板。
（二）實驗前準(zhǔn)備
試劑一：實驗前一天配制；取50 mL帶蓋玻璃瓶1個，按照正庚烷：無水甲醇：氯仿=24:1:25 的比例配置（自備），蓋緊后混勻；
試劑三：臨用前（盡量晚配）每瓶加入 13 mL 無水乙醇充分溶解，4℃可保存一周；
標(biāo)準(zhǔn)品：臨用前將粉末轉(zhuǎn)移到 10 mL 玻璃瓶中，加入 7.8 mL 氯仿充分溶解，即為 5μmol/mL 的棕櫚酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，4℃保存。
（三）樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量）
1. 血清中 FFA 測定：將所取血液，室溫靜置 1 h 后，于 4 ℃ 離心機 3500 rpm 離心 15 min，取上層血清置于 4℃冰箱保存，待測；
2. 組織中 FFA 含量測定：組織用生理鹽水沖洗干凈后，用吸水紙吸取表面水分，稱取約 0.1 g，加入 1 mL 提取液，勻漿后，8000 rpm，4℃離心 10 min，取上清液，置冰盒上待測。
（四）操作步驟（盡量在 30 min 內(nèi)完成測量）
1. 分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30 min 以上，調(diào)節(jié)波長到 550 nm，無水乙醇調(diào)零；
2. 試劑二在 37℃水浴中預(yù)熱 30 min 以上；
3. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：將標(biāo)準(zhǔn)品用氯仿稀釋成 1、0.8、0.6、0.4、0.2、0.1、0.05μmol/mL；
4. 按下表在 1.5mL 離心管中加入相應(yīng)試劑；
| 對照管 | 對照管 | 測定管 | 空白管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 |
| 蒸餾水（μL） | 30 | |||
| 樣本（μL） | 30 | |||
| 氯仿（μL） | 30 | |||
| 標(biāo)準(zhǔn)品（μL） | 30 | |||
| 試劑一（μL） | 300 | 300 | 300 | 300 |
| 試劑二（μL） | 120 | 120 | 120 | 120 |
| 充分振蕩10min后，3000rpm，離心10min（保證每管的震蕩頻率及時間一致） | ||||
| 上層溶液（μL） | 50 | 50 | 50 | 50 |
| 試劑三（μL） | 200 | 200 | 200 | 200 |
| 充分振蕩 2 min 后，靜置 15 min，取 200 μL 于微量玻璃比色皿/96 孔板中，在 550 nm 下測吸光值，分別記為 A 對照管、A 測定管、A 空白管、A 標(biāo)準(zhǔn)管。（對照管和空白管各只做 1 - 2 管） | ||||
1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：
以標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為x軸，以ΔA標(biāo)準(zhǔn)（ΔA=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）為y軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到方程y=kx+b。將ΔA（ΔA=A測定管-A對照管）帶入方程得到x。
2. 血清FFA含量：
FFA 含量（μmol/L）=1000x
3. 組織FFA含量：
(1) 按樣本蛋白濃度計算
FFA 含量（μmol/mg prot）=x×V樣總÷（Cpr×V樣總）=x÷Cpr
(2) 按樣本質(zhì)量計算
FFA 含量（μmol/g 質(zhì)量）=x×V樣總÷W
V樣總：上清總體積，1 mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；1000：單位換算系數(shù)，1L=1000mL。
六、實驗實例
1. 取小鼠血清進(jìn)行樣本處理，按照操作步驟，使用 96 孔板測得 A 對照管=0.108、A 測定管=0.310、ΔA=A測定管-A 對照管=0.310-0.108=0.202，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線 y =0.6679x+0.019，計算 x=0.274，按血清含量計算：FFA 含量（μmol/L）=1000x=1000×0.274=274 μmol/L。
本產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床診斷！