酵母系統(tǒng)蛋白表達
酵母表達系統(tǒng)兼有原核和高等真核系統(tǒng)的優(yōu)點，培養(yǎng)條件簡單、生長速度快、表達水平高、操作簡便、成本低廉，蛋白翻譯后能進行正確加工、修飾、合理的空間折疊，使得蛋白的可溶性得到提高；與昆蟲表達系統(tǒng)和哺乳動物表達系統(tǒng)相比，酵母表達系統(tǒng)操作簡單，成本低廉，可大規(guī)模進行發(fā)酵，是較理想的重組真核蛋白質(zhì)生產(chǎn)制備工具；酵母表達系統(tǒng)包括畢赤酵母表達系統(tǒng)和釀酒酵母表達系統(tǒng)，適合于穩(wěn)定表達有功能的外源蛋白質(zhì)。
服務(wù)優(yōu)勢
1）可克服大腸桿菌表達系統(tǒng)的不足，進行蛋白質(zhì)翻譯后的修飾合加工；
2）甲醇酵母表達系統(tǒng)具有翻譯后加工，適合真核生物基因產(chǎn)物正確折疊的細(xì)胞內(nèi)環(huán)境和糖鏈加工系統(tǒng)；
3）獨特的分泌信號序列保證了重組蛋白的大分泌量，目的基因產(chǎn)物在培養(yǎng)液中易于純化；
4）可選擇組成性表達或者誘導(dǎo)表達兩種表達體系，X33、GS115、SMD1168等多種菌株和多種載體。
服務(wù)流程
Fig. 酵母表達技術(shù)流程圖
重組蛋白制備技術(shù)
| 服務(wù)內(nèi)容 | 服務(wù)周期 | 內(nèi)容介紹 | 交付內(nèi)容 | |
|---|---|---|---|---|
| 重組酵母表達質(zhì)粒構(gòu)建 | 基因獲取及密碼子優(yōu)化 | 2 周 |
1.不同表達載體 2.不同親和標(biāo)簽 3.分泌或胞內(nèi)表達 |
測序報告 |
| 克隆至表達載體 | ||||
| 質(zhì)粒測序 | ||||
| 大量質(zhì)粒制備 | ||||
| 載體線性化及轉(zhuǎn)化 | 載體線性化 | 3~4周 | 不同表達菌株可選，PCR 鑒定5-10個克隆 | |
| 線性化載體電轉(zhuǎn)化 | ||||
| 重組高拷貝轉(zhuǎn)化子篩選 | 5-10個克隆篩選， Zeocin抗生素濃度篩選重組子，結(jié)合WB鑒定蛋白表達 | |||
| 小量表達及純化（2L） | 小量表達、純化及條件優(yōu)化 | 2~4周 | 優(yōu)化培養(yǎng)基，菌體密度，甲醇濃度，誘導(dǎo)時間等 |
1.可行性報告 2.提供0.1-1.0mg樣品 |
| SDS-PAGE 及 UV 分析 | ||||
| 大量表達及純化（10L以上） | 2~4周 | 可選擇搖瓶或者發(fā)酵罐培養(yǎng) |
1.純化蛋白 2.生產(chǎn)信息報告 3.質(zhì)檢報告 |
|
應(yīng)用
Fig 1. 重組質(zhì)粒測序圖譜
Fig 2. 酵母表達載體
Fig 3. 酵母表達純化PAGE鑒定圖